寡核苷酸适配子(aptamer)是用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,通过体外筛选、扩增和富集获得能与多肽、蛋白质、细胞器、核酸以及细胞和组织等靶物质高亲和力、高特异性结合的单链DNA/RNA寡核苷酸
[1,2,3]。本课题组在前期实验中利用基于细胞的SELEX技术(Cell-SELEX技术)筛选出多条对肝癌细胞HepG2细胞株具有高度靶向性及亲和力的适配子JHIT1 ~ JHIT7 (ssDNA),其中JHIT2的亲和力最佳,然后对适配子JHIT2用Iodogen法进行
131I的直接标记,但该法的标记率较低且稳定性较差
[4,5]。在适配子筛选的过程中,我们对适配子进行了荧光标记[羧基荧光素(FAM)、FITC、Cy5等]用于流式细胞技术及体外荧光显像试验以探讨其靶向性与亲和力。适配子的荧光标记简单易行,可由公司直接合成及纯化。在这过程中,我们发现适配子连接上功能基团FAM后,FAM可提供多个
131I标记的位点,为标记提供了结构基础,预计该法的标记效率会比直接标记法高。在本研究中,我们将在前期研究中筛选出的适配子JHIT2的末端连接上功能基团FAM,分别用氯氨T法及Iodogen法对其进行
131I标记,比较2种标记法的标记效能,并研究其标记产物在不同条件下的稳定性,为适配子介导肝癌的靶向放射显像或靶向放射治疗奠定基础。