子宫内膜癌（EMC）是常见的女性生殖道恶性肿瘤之一,占女性生殖道恶性肿瘤的20%~30%。在EMC所有的组织类型中,子宫内膜样腺癌约占70%。目前,与EMC的形成和发展相关的癌基因与抑癌基因主要包括PTEN、P27、P53、P16等,但具体机制尚不明确[1,2]。骨髓嗜病毒整合位点1（MEIS1）基因定位于人染色体中2p13.14,属于同源盒（HOX）基因的三氨基酸环延伸家族,广泛表达于正常人体组织中,其中在子宫内膜、子宫肌层中表达水平最高。研究表明,MEIS1介导子宫内膜容受性的建立等环节,其表达异常可能参与了EMC的发生和发展[3,4]。目前尚未有报道MEIS1在EMC的发生发展过程中,与雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的联合调节作用。因此,本研究拟采用免疫组织化学染色（免疫组化）检测MEIS1蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达,并探讨MEIS1、ER、PR在EMC的发生发展过程中的相互调节作用和相关性,现报告如下。
对象与方法
一、研究对象
收集2003年1月至2010年12月在中山大学孙逸仙纪念医院妇科行子宫切除的57例患者病历资料及术中切除组织病理标本,所有病理标本均经病理科医师复核确诊。其中45例为子宫内膜样腺癌患者（内膜癌组）,均行根治性或姑息手术切除子宫,术前未接受化学治疗、放射治疗及激素等治疗,年龄为（54.0±9.4）岁,所取组织为高分化腺癌19例、中分化腺癌14例、低分化腺癌12例。对照组为因子宫肌瘤、宫颈上皮内瘤变行子宫切除的12例患者,均排除其他系统性疾病,且近期均未服用过任何激素类药物,年龄（40.8±7.3）岁,所取组织为增生期内膜4例、分泌期内膜6例、绝经期内膜2例。本研究经中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会批准,所有入组患者或其家属均已签署知情同意书。
二、方法
1. 临床病理资料的收集
收集内膜癌组45例患者的临床病理资料,包括临床-手术分期（根据FIGO2010标准修订）、术后包括ER、PR病理的结果、肌层浸润、淋巴结转移等。
2. MEIS1蛋白的检测
采用非生物素二步法免疫组化染色,具体步骤：10%甲醛固定的子宫内膜标本,石蜡包埋后切片（4 μm）,脱蜡,3% H2O2去离子水孵育10 min,磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗2 min共3次,滴加MEIS1多克隆抗体（1∶25,ABCAM）,PBS（中杉金桥）冲洗2 min共3次,滴加兔IgG抗体-过氧化物酶（HRP）多聚体（PV-6001,中杉金桥）,室温孵育30 min,PBS冲洗2 min共3次,二氨基联苯胺（DAB）显色,蒸馏水充分冲洗,脱水,透明树胶封片。以MEIS1阳性的子宫内膜切片作为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。PR、ER 结果来源于患者病理结果。
3. 结果评价
以腺上皮细胞中出现黄色至棕黄色颗粒为MESI1蛋白阳性。在光镜下计数400个细胞,采用半定量双评分。阳性细胞数评分：阳性细胞数< 5%为0分、5% ~ 25%为1分、26% ~ 50%为2分、> 50%为3分。显色度评分：细胞核无显色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。2项评分相加之和等于0分为阴性（-）,1 ~ 2分为低表达（+）,3 ~ 4分为中表达（++）,5 ~ 6分为高表达（+++）。阳性例数为中表达例数与高表达例数之和。
三、统计学处理
采用SPSS 26.0分析数据。计数资料以例（%）表示,组间比较采用X2检验或Fisher确切概率法,ER、PR与MEIS1表达的关系采用配对X2检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
结果
一、MEIS1在不同子宫内膜组织中的表达
在子宫内膜样腺癌组织中,MEIS1蛋白主要表达于腺癌细胞胞核中,基质细胞中未见明显表达或弱表达。在正常子宫内膜组织中,MEIS1蛋白主要表达于子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞胞核中,胞浆中未见明显阳性表达,且在基质细胞中MEIS1表达强于腺上皮细胞,见图1。
二、MEIS1在子宫内膜样腺癌组织中的表达
内膜癌45例子宫内膜腺样癌组织中,MEIS1蛋白阳性18例（中表达13例、高表达5例）,阳性率为40%。对照组12例正常子宫内膜组织中,MEIS1蛋白阳性1例、阴性或低表达11例,阳性率为8%。内膜癌组MEIS1蛋白阳性率高于对照组（X2 = 4.275,P = 0.039）。
三、子宫内膜样腺癌组织MEIS1蛋白表达与临床病理特征的关系
MEIS1蛋白的阳性率与腺癌细胞分化级别、分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、脏器转移均无关（P均> 0.05）,见表1。
表1 MEIS1蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率与临床指标的关系[例（%）] |
| 临床病理特征 | 分类 | MEIS1阳性 | MEIS1阴性 | 2值 | P值 |
|---|---|---|---|---|---|
| 分化级别 | 高分化（G1） | 10（53） | 9（47） | 4.033 | 0.133 |
| 中分化（G2） | 6（43） | 8（57） | |||
| 低分化（G3） | 2（17） | 10（83） | |||
| 分期 | Ⅰ | 10（48） | 11（52） | 1.030 | 0.597 |
| Ⅱ | 4（36） | 7（64） | |||
| Ⅲ ~ Ⅳ | 4（31） | 9（69） | |||
| 肌层浸润深度 | < 1/2 | 12（50） | 12（50） | 2.143 | 0.143 |
| > 1/2 | 6（29） | 15（71） | |||
| 淋巴结转移 | 无 | 17（43） | 23（58） | - | 0.634a |
| 有 | 1（20） | 4（80） | |||
| 脏器转移 | 无 | 14（41） | 20（59） | 0.000 | 1.000 |
| 有 | 4（36） | 7（64） |
注：a Fisher确切概率法 |
表2 子宫内膜样腺癌组织中MEIS1蛋白与ER、PR表达的关系 单位：例 |
| 项 目 | MEIS1阳性 | MEIS1阴性 | 2值 | P值 |
|---|---|---|---|---|
| ER 阳性 | 15 | 17 | 8.450 | 0.004 |
| 阴性 | 3 | 10 | ||
| PR 阳性 | 17 | 18 | 13.473 | < 0.001 |
| 阴性 | 1 | 9 |
四、子宫内膜样腺癌组织MEIS1蛋白与ER、PR表达的关系
在子宫内膜样腺癌中,MEIS1蛋白与ER、PR的阳性率存在一定关系（P均< 0.05）。
讨论
EMC是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一,其中80%~90%的病理类型为子宫内膜样腺癌。近年来,其发病率有所上升,且呈年轻化趋势。目前研究显示细胞生长周期调节失控可能对子宫内膜癌的发生发展起着重要的调控作用。MEIS1属于HOX基因的三氨基酸环延伸家族,定位于人染色体中的2p13.14。作为HOX的不可缺失的辅助因子,MEIS1在巨核和红细胞生成中起关键作用[5]。HOXA/MEIS1/前B细胞白血病HOX基因3（PBX3）的过表达是混合谱系白血病（MLL）重排的急性髓细胞白血病（AML）标志。HOXA9和MEIS1被认为是MLL融合的最关键目标,它们的共表达可快速诱导AML[6]。但是在前列腺癌研究中,MEIS1-HOXB13转录调控抑制前列腺癌细胞增殖和转移[7]。本研究表明,正常子宫内膜组织中MEIS1在基质细胞中的表达水平强于腺上皮细胞,与Sarno等[8]的研究结果一致。本研究同时显示,子宫内膜样腺癌组织中MEIS1蛋白主要表达于腺上皮细胞的细胞核,正常子宫内膜组织的MEIS1蛋白阳性率低于内膜癌组,说明在异常增生的子宫内膜组织中MEIS1呈现高表达。Zhong等[9]发现子宫内膜癌中HOX10的表达低于正常子宫内膜。MEIS1与HOX10表达的不一致性,我们推测可能与其他抑癌基因的调控有关。
本研究对MEIS1蛋白的表达情况与子宫内膜样腺癌的不同分化级别、分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、脏器转移等因素进行了分析,结果显示MEIS1蛋白在不同分化级别、分期、肌层浸润深度、有无淋巴结转移、有无脏器转移中的阳性率均未见明显差异,这提示MEIS1可能与子宫内膜样腺癌的转移和预后关系不太明确,但尚需要扩大样本量进一步验证。
子宫内膜癌的预后与ER和PR存在着明确的关系[10]。本研究也对MEIS1、ER、PR在子宫内膜样腺癌组织中的表达情况进行了检测和分析,结果显示在子宫内膜样腺癌的病变组织中,MEIS1与PR、ER的阳性率有关,但具体的关系需进一步研究证实。
综上所述,MEIS1作为癌基因,其过表达可能通过HOX蛋白参与了子宫内膜样腺癌的发生和发展,MEIS1可能与子宫内膜样腺癌的进展及侵犯无关,不能作为子宫内膜样腺癌的预后评价指标。当然,这些结论尚需要大量的研究加以证实。