不同浓度谷氨酰胺对大鼠脂肪间充质干细胞体外培养的影响

新医学 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (5) : 322.

论著

唐明生;覃有振;戴刚;王慧深

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摘要

目的：探讨不同浓度左旋谷氨酰胺（L-谷氨酰胺）对大鼠脂肪间充质干细胞（AD-MSCs）体外培养的影响。方法：取SD大鼠腹股沟处皮下脂肪分离获取AD-MSCs，接种至含10%胎牛血清的完全培养液细胞培养瓶中。24 h首次换液后分为2 mmol/L L-谷氨酰胺组（2 mM组）和0.5 mmol/L L-谷氨酰胺组（0.5mM组）分别进行体外培养并及时传代。两组各取第1、3代AD-MSCs，每代各接种7块96孔板，每24 h各取一块96孔板用噻唑蓝（MTT）测定其生长曲线。两组各取第3代细胞进行成脂和成骨诱导分化，成脂鉴定使用油红O染色及成骨鉴定使用碱性磷酸酶及冯库萨染色。另各取第3代细胞在流式细胞分析仪上行CD29、CD31、CD44、CD45表面分子检测。最后进行细胞冻存及复苏实验。结果：从大鼠脂肪组织分离出的AD-MSCs在两种L-谷氨酰胺下均能稳定生长、增殖， 2 mM组生长曲线较0.5 mM组上移，细胞生长加速。两组第三代细胞均能向成骨和成脂方向分化，细胞表面抗原标志相同，即CD29 及CD44高表达，CD31、CD45几乎不表达。两组培养的AD-MSCs在液氮中冻存2个月后，细胞生长、增殖活性及多向分化能力无明显降低。结论：两种L-谷氨酰胺浓度体外培养的大鼠脂肪间充质干细胞均可稳定生长、增殖，2 mmol/L L-谷氨酰胺的细胞增殖速度比0.5 mmol/L可能更快，但两种L-谷氨酰胺浓度对AD-MSCs多向分化潜能、表面抗原表达及冻存后复苏的细胞活力等生物特性无明显影响。